测定意义:
GOGAT 广泛分布于植物中,和谷氨酰胺合成酶共同构成 GS/GOGAT 循环,参与氨同化的调控。GOGAT 分为以 NADH 为还原剂的 NADH-GOGAT 和以铁氧还蛋白为还原剂的Fd-GOGAT。Fd-GOGAT 主要存在于叶绿体基质中,与光合作用和光呼吸有关,主要同化NO- 还原和光呼吸产生的 NH4+。
测定原理:
Fd-GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸,形成两分子的谷氨酸,谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸的脱氢反应,同时产生 NADH,使 WST-8 显橙黄色,在 450 nm 下测定吸光值。
自备仪器和用品:
分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂清单:
试剂名称 | 规格 | 数目 | 贮藏 |
提取液 | 液体 60mL | x1 | 4℃ |
试剂一 | 粉剂 | x1 | 4℃ |
试剂二 | 液体 3mL | x1 | -20℃,避光 |
试剂三 | 粉剂 | x1 | -20℃ |
试剂四 | 粉剂 | x1 | -20℃,避光 |
试剂五 | 粉剂 | x1 | 4℃,避光 |
试剂六 | 液体 60mL | x1 | 4℃ |