测定意义:
PK(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的最后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生ATP的关键酶之一,因此测定PK活性具有重要意义。
测定原理:
丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)催化磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映PK活性。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂清单:
试剂名称 | 规格 | 数目 | 贮藏 |
提取液 | 液体 60mL | x1 | 4℃ |
试剂一 | 液体 70mL | x1 | 4℃ |
试剂二 | 液体 400μL | x1 | -20℃ |
试剂三 | 粉剂 | x1 | -20℃ |
试剂四 | 粉剂 | x1 | -20℃ |
试剂五 | 粉剂 | x1 | -20℃ |