测定意义:
吡咯啉-5-羧酸还原酶( P5CRs) 是普遍存在于原核和真核生物中的一类重要的管家蛋白。其主要功能是催化脯氨酸生物合成的最后一步反应,将吡咯啉-5-羧酸( P5C) 转化为脯氨酸, 在调节细胞凋亡等一系列病理和生理过程中起着重要作用。
测定原理:
P5CR 具有噻唑烷-4-羧酸脱氢酶活性,催化噻唑烷-4-羧酸的脱氢反应,同时将 NAD 转化为NADH,使 WST-8 变成橙黄色,测定 450nm 下吸光值增加速率来反映酶的活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 3mL×1 瓶,4℃避光保存。