测定意义:
脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同,分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。鸟氨酸转氨酶( δ-OAT) 是 是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。
测定原理
鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和NADH作用下发生氨基转移反应生成吡咯啉-5-羧酸(P5C),同时产生NAD,通过检测340nm处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外可见分光光度计、1mL石英比色皿。
试剂组成和配制
提取液:液体55mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体70 mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加20mL试剂一充分溶解;用不完的试剂4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加20mL试剂一充分溶解;用不完的试剂4℃保存。
试剂四:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每瓶加10mL试剂一充分溶解;现配现用。