测定意义:
吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS, Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以谷氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。
测定原理:
吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷氨酸生成P5C过程中分解ATP生成ADP和无机磷,通过钼酸铵比色法测定单位时间内产生无机磷的量可确定P5CS活性。
需自备的仪器和用品:
可见外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体60 mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体6 mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体6 mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存,用时加入25 mL蒸馏水,溶解后4℃保存一周;
试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存,用时加入25 mL蒸馏水,溶解后4℃保存一周;
试剂六:液体25mL×1瓶,室温保存;
试剂七:10mmol/L标准磷贮备液10mL×1瓶,4℃保存。
0.5μmol/mL 标准磷应用液配制:将试剂七 20倍稀释,即取 0.1mL试剂七加1.9mL蒸馏水充分混匀。