测定意义:
天冬酰胺酶(EC 3.5.1.1,ASNase)是一种酰胺水解酶,能够将L-天冬酰胺脱去氨基生成L-天冬氨酸和氨。该酶具有抗肿瘤活性,在食品和医药等领域应用十分广泛。
测定原理:
天冬酰胺酶(ASNase)催化天冬酰胺水解成天冬氨酸和氨,利用氨在强碱的环境下与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液颜色稳定。其在630nm处有特征吸收峰,通过检测氨增加的速率,即可计算该酶活性大小。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿(光径1cm)、台式离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
试剂清单:
试剂名称 | 规格 | 数目 | 贮藏 |
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提取液 | 液体 50mL | x1 | 4℃ |
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试剂一 | 液体 20mL | x1 | 4℃ |
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试剂二 | 粉剂 mg | x2 | 4℃ |
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试剂三 | 液体 20mL | x1 | 4℃ |
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试剂四 | 液体 24mL | x1 | 4℃ |
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试剂五 | 液体 12mL | x1 | 4℃ |
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试剂六 A液 | 液体 7mL | x4 | 4℃ |
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试剂六 B液 | 液体 μL | x1 | 4℃ |
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标准管 | 液体 mL | x1 | 4℃ | 10μg/mL 氨标准液 |