测定意义:
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理:
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在585nm处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿,蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。(若出现结晶,可80℃左右加热溶解后使用)
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。