测定意义:
FAS是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。
测定原理:
FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+;NADPH在340nm有吸收峰,而NADP+没有;通过测定340nm 光吸收下降速率,计算FAS活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体25mL×1瓶,-20℃保存。用前1 d取出置于4℃充分解冻后混匀。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入550 μL试剂四,充分溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入550 μL试剂四,充分溶解。
试剂四:液体25mL×1瓶,4℃保存。
试剂五:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入1050 μL试剂四,充分溶解。
用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。