测定意义:
α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
测定原理:
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:100mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:20mL×1瓶,-20℃保存;
试剂三:1.5mL×1支,-20℃保存;
试剂四:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂×1瓶,-20℃保存;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;