测定意义:
MCS广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,与柠檬酸合酶(CS)共同参与三羧酸循环的调节。
测定原理:
MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸产生甲基柠檬酰辅酶A,进一步水解产生甲基柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水
试剂组成和配制:
试剂一:液体100mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:液体20mL×1瓶,-20℃保存;
试剂三:液体1.5mL×1支,-20℃保存;
试剂四:液体30mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入1mL蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;