测定意义:
ICDHm(EC 1.1.1.41)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸,同时将NAD+ 还原为NADH,是三羧酸循环的限速酶之一,其催化的反应是细胞NADH主要来源之一。
测定原理:
ICDHm催化NAD+ 还原生成NADH,导致340nm处光吸收上升。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:100mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:20mL×1瓶,-20℃保存;
试剂三:1.5mL×1支,-20℃保存;
试剂四:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂×1支,4℃保存;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;