测定意义:
吲哚乙酸(IAA)在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小,对调节体内吲哚乙酸的水平,起着重要的作用,而影响植物的生长。
测定原理:
在无机酸存在情况下,吲哚乙酸能与FeCl3作用,生成红色螯合物,该物质在530nm处有最大吸收峰,酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、1.5mL离心管、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂清单:
试剂名称 | 规格 | 数目 | 贮藏 |
试剂一 | 液体 120mL | x1 | 4℃ |
试剂二 | 液体 5mL | x1 | 4℃ |
试剂三 | 液体 5mL | x1 | 4℃ |
试剂四 | 液体 10mL | x1 | 4℃ |
试剂五 | 液体 2mL | x1 | 4℃,避光 |
试剂六 | 液体 50mL | x1 | 4℃ |
样品提取(按照步骤依次操作):
一、组织样本
1、按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。
2、然后离心10min(8000g离心力,4℃),取上清置冰上待测。
二、细菌、真菌样本
1、按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);
2、然后离心10min(8000g离心力,4℃),取上清置于冰上待测。
三、血清等液体样本
1、直接测定