测定意义:
活性氧(reactive oxygen species, ROS)是植物体内的一把“双刃剑”。ROS作为信号分子在植物生命活动中发挥关键作用, 但ROS过量积累会造成氧化损伤,测定ROS含量对于评估植物细胞内的氧化还原状态至关重要。
测定原理:
ROS荧光探针是一类无色、无荧光的染料分子,利用化学荧光指示剂即荧光探针:2',7-Dichlorofluorescin Diacetate,(DCFH-DA),在细胞内与ROS发生反应后生成具有强荧光的产物,通过检测产物的荧光强度可在一定程度上反映组织内的活性氧,这种荧光信号在激发波长488nm和发射波长525nm处有最大波峰,其荧光强度和活性氧水平成正比。
自备仪器和用品:
荧光酶标仪、黑色96孔板、可调式移液器、低温离心机、研钵/匀浆器、300目尼龙网、冰和蒸馏水。
试剂清单:
试剂名称 | 规格 | 数目 | 贮藏 | 备注 |
提取液 | 液体 75mL | X2 | 4°C |
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试剂一 | 液体0.125mL | x1 | -20°C | 低温时可能出现结晶现象,使用前室温震荡溶解即可 |